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  Pour détecter et dénombrer les légionelles, le prélèvement est mis en culture en 4 étapes : Ensemencement : 1 litre Pour dénombrer les concentrations importantes en légionelles : une partie de l’échantillon (200 µ l) est ensemencée directement sur un milieu de culture sélectif (après dilution au 1/10 pour les eaux sales et/ou non filtrables). Pour détecter des légionelles en faible quantité et éliminer la flore microbienne empêchant leur croissance : l’autre partie de l’échantillon est traitée et concentrée. Elle est entièrement filtrée si l’eau est propre, ou filtrée (500 ml) et centrifugée (500 ml) pour les eaux sales et/ou non filtrables. Le concentré est remis en suspension dans 5 ml d’échantillon primaire, dilué au 1/10 et soumis à un traitement acide et thermique, avant d’être ensemencé. Incubation et lecture : 10 jours Les milieux ensemencés sont mis en culture dans un incubateur à 37°C. Ils sont observés après 3 à 5 jours, puis lus définitivement après 10 jours d’incubation. On repère les colonies de légionelles à :  Leur
coloration gris bleu, voire blanchâtre Leur
bord rosé et translucide Leur
aspect “verre fritté” à la loupe binoculaire
(grossi 30 fois).Confirmation après repiquage On procède au repiquage des colonies pendant 3 jours à 37°C. Le repère : les légionelles cultivent sur gélose BCYE  avec
L-cystéine, mais ni sur gélose BCYE
sans L-cystéine, ni sur gélose au sang. Reste à
identifier l’espèce Legionella
pneumophila par immunofluorescence (norme
NF T 90-431) ou par des tests d’agglutination au latex (norme
NF XPT 90-431).  Interprétation des résultats
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